产品描述
ATP作为关键的能量分子，能够反映活细胞的代谢水平。在二维培养和类器官培养条件下，ATP含量与活细胞数量均呈现强线性关系。因此，ATP定量可用于评估类器官中的活细胞数量。类器官活性ATP检测试剂盒专为类器官微组织检测设计，基于二维细胞活性检测试剂开发。该试剂盒广泛适用于各类类器官样本（如类器官与3D肿瘤球）的细胞活性检测。测试表明，本产品在用于类器官细胞活性检测时具有增强的裂解能力。对于培养在基质胶中的3D微组织，无需去除基质胶即可直接进行检测。
类器官活性ATP检测试剂盒包含重组荧光素酶与荧光素，可直接添加至培养体系中进行检测。该检测试剂可自动裂解细胞，使活细胞中的ATP释放至体系中并与荧光素酶发生反应。产生的化学发光强度与体系中活细胞数量成正比。
使用说明
本产品仅供研究使用。
培养基成分变异性：不同培养基的化学成分可能存在差异。因此，当使用不同类型的培养基和血清时，发光强度和衰减速率可能有所不同。此外，在对细胞聚集体进行化合物处理时引入的溶剂也可能影响发光信号。建议设置无细胞培养基的空白对照实验。
微生物污染：环境中的微生物污染会引入外源性ATP，导致背景信号升高。为降低此风险，操作时需佩戴口罩和乳胶手套，保持工作台面清洁，并小心处理培养板盖。
ATP污染：由于存在ATP污染的风险，在分装试剂时需谨慎操作，并尽量减少冻融循环次数。
一、使用方案
1. 单通道/多通道移液器；3D微组织培养多孔板；多孔板振荡器；酶标仪（带发光检测模块）。
2. 解冻：将试剂置于4℃冰箱中过夜解冻。复温：使用前，将试剂置于22-25℃水浴中平衡至室温。混匀：使用前轻轻颠倒试剂数次，使其充分混合。
3. 将培养板从培养箱中取出，在室温下放置10min，使培养板温度平衡至室温。
注：为确保结果的一致性，请确保在使用前将培养板和检测试剂完全平衡至室温，特别是在处理大批量样本时。若未充分平衡，可能导致板内温度不均匀，从而在中心孔与边缘孔之间产生梯度效应。边缘效应可能导致发光信号不稳定，建议不要在边缘孔中铺板样本。
4. 将室温平衡后的检测试剂按1:1体积比加入培养板。对于96孔板，向类器官培养体系中每个含100uL培养基的孔内加入100uL检测试剂（无需去除ECM或基质胶）。
注：确保每个孔中留有足够的样本量，以便进行充分混合，防止孔间交叉污染。对于96孔板，细胞数量在100至100,000个之间存在强线性关系。但不同细胞类型的上限可能有所差异。建议96孔板每孔细胞数量不超过100,000个，384孔板每孔不超过20,000个。
5. 使用酶标仪进行剧烈线性振荡1000rpm 5min，确保细胞充分裂解。将板置于室温20min，然后测量化学发光信号。
注：确保试剂与类器官样本充分混合以实现细胞完全裂解，从而获得最佳结果。若细胞裂解不充分导致孔间发光信号不均，可考虑提高振荡速度或延长孵育时间进行优化。
6. 测量化学发光信号，并根据发光读数分析类器官的相对存活率。
注：根据仪器要求调整参数。温度梯度、细胞接种不均匀或多孔板的边缘效应可能导致板内发光信号出现差异。
