产品描述
人脑（扩增）类器官试剂盒是一种用于人脑类器官（hFBs）的无血清培养基。在人脑类器官扩增培养基中，人脑组织在体外条件下自组织形成hFBs，成功复现了体内细胞异质性和复杂组织结构的关键特征。这些hFBs展现出持续扩增的能力，该过程从根本上依赖于组织完整性的保持。这种结构保存有助于形成类天然细胞外基质微环境，这对维持hFBs持续增殖至关重要。hFBs在再生生物学领域也具有应用潜力，并有助于理解发育及疾病相关生物学机制。
使用说明
注：本产品仅供研究使用。
一、实验前准备
在开始实验流程前，请确保所有组分与设备均已准备妥当：
1. 确认所有组分均按照手册提供的指南进行储存。对于敏感试剂，应避免反复冻融。
2. 确保所有设备，如培养箱、移液器和离心机，均经过校准且功能正常。
3. 完全培养基配置：冰上或4℃解冻补充剂B&C，解冻后震荡混匀。
例：取9.56mL类器官扩增培养基+0.4mL补充剂B（25*）+0.04mL补充剂C（250*），充分混匀。
注：无需额外加入抗生素，完全培养基保存于4℃，且在2周内使用。
4. 类器官培养基质胶ECM置于4℃解冻。
5. 完全培养基室温平衡。
二、类器官构建方案
1. 使用锥形管在冰上采集原代人类脑组织，置于组织保存液中。组织样本需在4℃条件下保存直至分离程序开始。
2. 评估所获组织是否纯为大脑皮层。在解剖显微镜下，尽可能使用手术剪或手术刀及镊子去除非上皮成分。否则，继续执行步骤3。
3. 使用上皮类器官基础培养基冲洗组织。
4. 在1.5mL离心管中，使用手术剪将组织切成0.8-1mm3的小块。
5. 在细胞培养皿中静置1-2min，吸去上清液，将组织片段重悬于上皮类器官基础培养基中；重复一次。
6. 吸弃上清液，将组织碎片分装至预先用润洗液处理过的6孔板中，每孔约20-30个碎片。
注：吸取碎片前，用无菌剪刀将移液器吸头尖端剪去3-5mm。保持垂直剪切角度以确保碎片流畅转移。
7. 加入需量的人脑类器官扩增培养基，将培养板置于轨道摇床上，在37℃、5%CO2的加湿培养箱中以恒定转速（90 rpm）持续旋转。
8. 每2-3d更换一次培养基：小心地从孔中吸出旧培养基，更换为新鲜且预热过的类器官扩增培养基。
9. 密切观察类器官形成过程。理想情况下，人脑类器官应持续传代培养直至直径达到约2-3mm。
三、类器官传代
1. 使将人脑类器官扩增培养基在37℃条件下预热，吸去上清液，将类器官重悬于1.5 mL上皮类器官基础培养基中。在细胞培养皿中，仔细将类器官切碎成0.8-1mm的小片段。
注：吸取片段前，用无菌剪刀移去移液器吸头尖端3-5mm。保持垂直切割角度以确保片段顺畅流动。
2. 吸弃上清液，将类器官片段转移至经润洗液预处理的6孔板中，并小心地将预温培养基加入孔内。
3. 将培养板置于37℃、5%（体积/体积）CO2的恒湿培养箱中，并在轨道摇床上以恒定转速（90 rpm）进行旋转培养。
