产品简介
本产品是用于 Western Blot 湿转法的快速湿转液,在传统 WB 的转膜液的基础上进行了改良,能在 400mA恒流 10-30 分钟快速完成将蛋白转至 NC 膜或 PVDF 膜上,较传统的湿转液相比产热低,无需冰浴,具有快速优良的转膜效果。本产品用无水乙醇代替甲醇,安全无害,开瓶即可使用。
使用说明
1.将 NC 膜、PVDF 膜(需用甲醇或者乙醇激活膜)浸泡在本产品缓冲液中。
2.将转印所需的物品以负极为底(一般为黑色)按照海绵,支撑纸,跑完电泳的 PAGE 凝胶,转印膜,支撑纸, 海绵的顺序依次摆放,根据摆放的凝胶位置用圆珠笔在转印膜上标注孔位,然后转移至电泳槽中(插入装置时保证转印膜朝向转印槽正极),注意摆放过程中不要出现气泡,避免影响蛋白从 PAGE 胶上转印到膜上 。倒入1 ×WB 免降温快速湿转液,湿转液要没过转印膜。将电泳槽设置 400mA 恒流, 电泳 15-30 分钟即可(针对1.0mm 厚的凝胶,若 0.75mm 厚适当减少时间,1.5mm 厚适当增加时间),同时根据蛋白大小调整电泳时间。
| 恒流 | 蛋白大小 | 电泳时间 |
300mA | 20kDa 以下 | 20 分钟 |
| 20-100kDa | 30 分钟 | |
| 100-200kDa | 45 分钟 | |
| 200kDa 以上 | 60 分钟 | |
400mA | 20kDa 以下 | 15 分钟 |
| 20-100kDa | 25 分钟 | |
| 100-200kDa | 35 分钟 | |
| 200kDa 以上 | 45 分钟 |
注意事项
1.使用时注意 1×WB 免降温快速湿转液尽量全部没过转印膜,避免部分没有浸润在转膜液内的蛋白转膜效果受影响;
2.PVDF 膜在使用前需要浸泡在无水乙醇 30s-60s 以激活;
3.若室内气温高,建议 45 分钟以上的转膜进行冰浴;
4.本产品即开即用,建议使用 2-3 次。本产品为无色透明液体,若产品颜色变为棕黄色,即时丢弃,避免影响转膜效果;
5.为了您的安全与健康,请穿实验服并带一次性手套操作。