产品简介
G418 Sulfate(G418硫酸盐),也称作 Geneticin(遗传霉素),是一种结构类似于庆大霉素B1(GentamycinB1)的氨基糖苷类抗生素,通过影响 80S核糖体功能和阻断延伸步骤来干扰蛋白合成,对原核和真核等细胞都有毒性,包括细菌、酵母、高等植物和哺乳动物细胞,也包括原生动物和蠕虫。其抗性基因(主要为neo基因)位于转座子Tn601(903)或Tn5(来源于细菌),但是可以在真核细胞中表达。通过基因重组技术将这些抗性基因导入细胞,使其获得对G418的耐药性,从而用来筛选和维持培养携带抗性基因的原核或者真核细胞。
产品特点
1. 常用于筛选表达neo基因的真核或原核多克隆或单克隆细胞。
2. G418不仅用于稳定细胞株的筛选,也用于稳定细胞株的维持。
3. 本品种含G41850mg/ml,常用工作浓度为100-500ug/ml。
使用说明
在使用G418筛选抗性细胞之前,必须先确定抗生素在目的细胞中的最佳使用浓度。操作方法:将细胞稀释到1000个/ml,在100ug/ml~1000ug/ml的G418浓度范围内进行筛选,选择出在10~14天内使细胞全部死亡的最低G418浓度来进行下一步的筛选试验。
(1) 细胞转染含neo基因的质粒,或感染含neo基因的慢病毒。24h(转染)或48h(慢病毒感染)后,细胞继续培养于含一定浓度G418的培养基中(注意细胞不要太密,最好细胞密度不超过 25%);
(2) 每3-4天换液,更换新的含G418 的培养基;
(3) 挑单克隆细胞到 35mm培养皿中,继续于含G418的培养基扩大培养;
(4) 扩大培养的带抗性的细胞可用于后续验证和细胞功能学实验。
注意事项
1. 本产品仅用于研究和实验室用途,不适用于药物,家庭或其他用途。
2. 请避免直接与皮肤接触,操作后请及时清洗双手。
